皮肤致敏（Skin sensitization）即皮肤接触过敏原后所产生的变应性应答，是一种由外源物质引发的IV型过敏反应。过敏性接触性皮炎（Allergic contact dermatitis，ACD）作为皮肤致敏的临床表型，在人群中发生率高达15%~20%。因此，皮肤致敏性评价是化学品毒性评价的重要内容之一。近年来随着人们对动物保护和福利的认识逐渐深入，发展和应用动物试验替代方法已成为共识。我国化学品动物试验替代方法开展起步较晚，目前仍以动物试验为主。然而从长远看，发展化学品毒理学安全性评价动物替代势在必行。

　　作为第三方检测中心，中科测试机构拥有CMA和CNAS认证检测资质，检测设备齐全，数据科学可靠，可出具国家认可的皮肤致敏试验报告。

　　小鼠局部淋巴结试验（LLNA）

　　目前，普遍认为LLNA和豚鼠最大值试验仍是皮肤致敏性体内评价实验的金标准。豚鼠最大值试验通过观察皮肤反应而进行定性检测，而LLNA则依据淋巴细胞的增殖对受试物致敏性进行评价。皮肤致敏剂可诱导淋巴细胞增殖，通过氚化胸腺嘧啶脱氧核苷标记法、ATP生物发光法或BrdU酶联免疫法可检测淋巴细胞增殖。LLNA在一定程度上可减少动物使用和提升动物福利水平，但不能完全避免动物使用。此外，LLNA不能很好地区分致敏物和刺激物，且可能出现假阳性或假阴性结果。

　　KeratinoSensTM/LuSens试验

　　研究表明Keap1（Kelch-like ECH-associatedprotein1）是抗氧化应答的主调控因子，并可与Nrf2（Nuclear factor（erythroid-derived2）-like2）相互作用，其对改善氧化应激至关重要。Keap1蛋白包含高活性半胱氨酸残基。小分子与Keap1的活性半胱氨酸残基进行共价修饰，使Keap1从转录因子Nrf2上解离，Nrf2随后在核内聚集，并激活启动子序列中具有ARE（Antioxidant Response Elements）的基因。

　　很多响应致敏剂作用的细胞标志物由Keap1-Nrf2-ARE通路所调控[。基于上述理论，研究人员开发出了KeratinoSensTM和LuSens两种定量测试方法。KeratinoSenTM和LuSens的主要区别在于ARE元件来源，前者源于人AKR1C2（Aldo-ketoreductasefamily1member C2）基因，后者源自大鼠NQ01（NAD（P）H quinone dehydrogenase1）基因。经济合作与发展组织（0rganization for Economic Cooperation and Development，0ECD）指南指出KeratinoSensTM试验的阴性结果可能存疑，因为受试物若选择性与赖氨酸残基反应也可被评估为非致敏物[2。KeratinoSensTM/LuSens试验也可能出现假阴性或假阳性结果，并且对含酐的待测物预测存在困难。

　　h-CLAT/U-SENS（Myeloid U937 skinsensitisation test）试验

　　b-CLAT/U-SENS试验主要利用皮肤致敏有害结局通路KE3（Keyevent3）：树突状细胞可与过敏原相互作用，摄取并呈递过敏原表位至T淋巴细胞。而树突状细胞或单核细胞激活后其细胞表面标志物CD86或CD54会发生相应表达变化。h-CLAT是将待测物暴露于人单核细胞白血病细胞系THP-1，通过检测细胞CD86和CD54的表达变化评估待测物的致敏性。与之类似U-SENS将受试物暴露于人淋巴癌细胞系U937并检测细胞表面标志物CD86的变化。h-CLAT高度简化，但其对角质化细胞缺乏作用，此外因其灵敏度低，对弱致敏剂预测较差。h-CLAT采用流式细胞术检测，因而可能带来荧光干扰和待测物的细胞毒性干扰。

　　重组人表皮致敏试验

　　三维重组人表皮模型（RHE模型）由人源性表皮角质细胞组成，该模型于气-液界面培养，因而可直接应用于化学品。据文献报道，RHE模型呈现出与人皮肤类似的代谢能力，这提示RHE模型可代谢pre/pro-半抗原（pre/pro-hapten），并用于评估相关化学品。SenCeeTox主要监测8个Nrf2依赖基因，而SENS-IS则关注24个Nrf2-依赖基因和41个其他靶标基因。SENS-IS则通过65个靶标检测炎症和细胞保护应答，在对150个化学品测试中，与LLNA相比准确度达到100%。

　　EpiSensA则基于炎症和细胞保护相关基因ATF3（Activating transcription factor 3）、1L-8、DNAJB4（ DnaJ homolog subfamily B member 4）和GCLM（ Clutamate-cysteine ligase modifier subunit ）等进行检测。

　　EpiSensA与LLNA相比，在29个亲脂性化学品测试中，其灵敏度、特异性和准确度分别达到93%，100%和93%；另外在43个亲水性化学品测试中（含11个pre/pro-半抗原），其灵敏度、特异性和准确度分别达96%，75%和88%。

　　直接肽反应试验（DRPA）

　　2004年，Gerberick等提出直接肽反应试验该法将待测物与谷胱甘肽、半胱氨酸多肽、赖氨酸多肽或组氨酸多肽孵育后，采用HPLC-UV检测未与待测物共价结合的多肽。而后Gerberick等开发了一套基于多肽损耗和LLNA数据的预测模型，并采用库珀统计法评估模型对致敏物的区分程度。研究表明，半胱氨酸多肽1：10和赖氨酸多肽1：50模型在多肽比率和无谷胱甘肽方面平衡较好，预测准确度达89%（81个待测物）。经过两轮实验室对比验证，结果表明其重现性良好。研究人员将辣根过氧化物酶-过氧化氢（ Horseradish Peroxidase and Hydrogen Peroxide， HRP/P）加入多肽孵育体系后，使得DPRA可检测需酶介导激活的pro-半抗原，从而进一步拓展了DPRA的应用范围。