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化妆品功效评价实例:某某发酵液的美白及舒缓修复功效方法介绍
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  • 2025-01-15

  化妆品功效宣称评价是指通过文献资料调研、研究数据分析或者化妆品功效宣称评价试验等手段,对化妆品在正常使用条件下的功效宣称内容进行科学测试和合理评价,并作出相应评价结论的过程。承担化妆品功效宣称评价的机构应当建立良好的实验室规范,完成功效宣称评价工作和出具报告,并对出具报告的真实性、可靠性负责。其中祛斑美白、防晒、防脱发以及宣称新功效的化妆品应当由化妆品注册和备案检验机构按照强制性国家标准、技术规范的要求开展人体功效评价试验,并出具报告。




  作为第三方检测中心,中科测试机构拥有CMA和CNAS认证检测资质,检测设备齐全,数据科学可靠,可出具国家认可的化妆品功效评价报告。


  美白功效评价


  人体皮肤中黑色素细胞可产生酪氨酸酶,酪氨酸酶可将酪氨酸转化成多巴色素,多巴色素进而形成黑色素,黑色素通过黑色素细胞传递给周边表皮细胞,引起肤色变黑。斑马鱼胚胎在发育至24 h时,皮肤黑色素开始形成,皮肤黑色素生成机制与人类一致,通过在斑马鱼胚胎皮肤黑色素形成过程中给予受试物处理,利用显微镜观察皮肤黑色素抑制情况,评价受试物是否具有美白功效。


  测试分别设置空白对照组、阳性药组(3g/L)和样品组(1%),每组各设3个生物学重复,每个重复设置8个斑马鱼胚胎,每孔加入对应各浓度组工作液5mL;将各待测组放置于(28.5±0.5)°C恒温培养箱中孵育24h;用1mg/mL的链霉蛋白酶溶液脱膜;用3%甲基纤维素固定后,在体视显微镜下观察并拍照。拍照时斑马鱼胚胎应头朝左、腹部朝下、身体保持水平,所有斑马鱼胚胎的拍照结果须在相同的仪器和环境条件下完成,且斑马鱼胚胎体位保持一致,利用Image J软件分析每个黑色素灰度值,并对各组数据进行差异显著性检验。


  修护功效评价


  本测试以成纤维细胞为测试系统,通过检测细胞迁移情况来评价待测样品皮肤屏障损伤修护功效。


  细胞毒理学实验:按8X103个孔的接种密度接种细胞至96孔板,培养箱(37℃、5%CO2,)中孵育过夜。实验设置调零组、对照组、阳性对照组和样品组。样品组中、,每个样品设置8个浓度梯度,每个浓度梯度下设置3个重复孔。按测试浓度设定表配制不同浓度的样品工作液。待96孔板中细胞铺板率达到40%~60%时进行给药。对照组每孔加入200μL含10%PBS的培养液;阳性对照组每孔加入200μL含10%DMSO的培养液;样品组每孔加入200 μL含有相应浓度样品的培养液;调零组无细胞接种,仅加入200 μL细胞培养液。给药完成后将96孔板放置在培养箱(37℃、5%CO2)中培养。细胞孵育培养24h后弃掉上清,加入MTT工作液(0.5 mg/mL),37°C避光孵育2 h,孵育结束后,弃掉上清,每孔加100μL DMSO,在490nm处读取A值。细胞相对活力计算公式为:细胞相对活力=(样品孔A-调零孔A)/(溶剂对照孔A-调零孔A)x100%。


  细胞划痕测试方法:收集对数生长期细胞,按照细胞密度为1X10个/孔接种至24孔培养板。在培养箱(37℃、5%CO2)中培养24h后,以200 L枪头垂至于24孔板划出“损伤”用PBS洗细胞3次,去除划下的细胞。放入培养箱(37℃、5%CO2) 培养24 h, 每组设置3个平行。 运用倒置显微镜对迁移的各组细胞进行拍照, 采用Image Pro Plus 软件计算划痕面积平均值。 愈合率计算公式为: 愈合率=(初始划痕面-划痕面积) /初始划痕面积×100%。


  舒缓功效评价


  皮肤受到外界刺激后,通过不同途径最终导致皮肤产生刺激反应。当细胞受到刺激,通过分泌IL-6、IL-1α、IL-1β、IL-8、TNF-α等因子,引起皮肤刺激。本实验基于舒缓功效体外评估模型,采用UVB刺激角质形成细胞进行舒缓功效评估。


  细胞毒理学实验:按1x104个/孔的接种密度接种细胞至96孔板,培养箱(37℃、5%CO2)中孵育过夜。实验设置调零组、对照组、阳性对照组和样品组。样品组中,每个样品设置8个浓度梯度,每个浓度梯度下设置3个重复孔。


  抗皱功效评价


  本测试以成纤维细胞为测试系统,针对主要类型的Collagen I的含量变化情况,评价待测样品是否具有抗皱紧致功效。


  细胞毒理学实验:同修护实验。


  抗皱实验:按适宜的接种密度(8x104/孔)接种细胞至24孔板,培养箱(37℃、5%CO2)中孵育过夜。实验设置空白对照组、阴性对照组、阳性对照组和样品组。样品组设置3个浓度梯度。按测试浓度设定表配制不同浓度的受试物工作液。待24孔板中细胞铺板率达到40%~60%时进行给药。空白对照组、阴性对照组每孔加入1mL的细胞培养液:阳性对照组每孔加入1mL含有100μg/mL维生素C和7μg/mL维生素E的培养液;样品组每孔加入1mL含有相应浓度受试物的培养液。给药完成后,阴性对照组、阳性对照组及样品组接受总剂量为9J/cm2的UVA辐射,同时,空白对照组放置于相同的环境(UVA辐射剂量为0J/cm2)。孵育培养48 h后,收集细胞培养上清液于EP管中,置于-80℃冰箱冷冻保存。根据ELISA检测试剂盒的操作说明书对CollagenI的含量进行检测分析。