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2025-02-08
细菌回复突变试验（Ames试验）是一种用于检测化学物质是否具有致突变性的重要方法。该试验由美国科学家布鲁斯·艾姆斯（BruceAmes）在1970年代开发，并广泛应用于评估新化学物质（如药物、食品添加剂、农药、化妆品成分等）的致突变潜力。
Ames试验具有快速、简便、敏感、经济等优点，适用于大规模筛选化合物的致突变性。它能够检测多种类型的基因突变，包括碱基对替换和移码突变。该试验在多个领域得到广泛应用，包括食品安全性评估、环境监测、药物和化学品毒性评估、农药安全性评估以及抗突变物筛选等。
细菌回复突变试验方法
Ames试验利用特定类型的突变菌株，这些菌株携带有特定的基因突变，导致它们不能在没有外源性营养物质的培养基中生长。这些突变菌株通常是营养缺陷型，无法自行合成某些必需氨基酸或维生素。
当将这些菌株暴露于测试化合物中时，如果化合物具有致突变性，它会诱导这些菌株产生基因回复突变，使其重新获得在无外源性营养物质的培养基上生长的能力。通过检测这些回复突变菌株的生长情况，可以评估化合物的致突变性。
1、试验步骤
预实验：对未知或怀疑对试验菌株有抑制作用的试验样品进行预实验，评估样品是否有细胞毒性。如有抑制作用，则需对试验样品进行梯度稀释，直至找到无细胞毒性的浓度范围。
2、主试验：
将冷冻保存的菌株培养物接种于营养肉汤培养基中，培养至对数增长期。
融化顶层培养基，并将其分装于无菌小试管中。
在保温的顶层培养基中加入试验菌株的新鲜菌液、试验样品浸提液（或阴性、阳性对照液）以及代谢活化剂（如S9混合物），混匀后迅速倾倒在底层培养基上，静置凝固。
将培养皿放入培养箱中，在适宜温度下培养48-72小时。
观察和计数回复突变菌落的数量。
细菌回复突变试验常用菌株
细菌回复突变试验常用的菌株包括组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌（TA98、TA100、TA1535、TA1537/TA97/TA97a）和TA102或埃希氏大肠杆菌WP2uvrA（pKM101）。
这些菌株的具体用途如下：
组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌：这些菌株用于检测组氨酸靶基因中鸟嘌呤-胞嘧啶（G-C）位点的碱基置换或移码突变。
TA102或埃希氏大肠杆菌WP2uvrA：这些菌株用于检测组氨酸或色氨酸基因中腺嘌呤-胸腺嘧啶（A-T）位点的碱基置换或移码突变。
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